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荧光定量

发布日期:2018-01-26 浏览次数:268

荧光定量PCR

荧光定量PCR所使用的荧光化学可分为两种:荧光探针和荧光染料。而荧光定量 PCR 的方法相应的可分为特异类和非特异类两类,特异性检测方法是在PCR反应中利用标记荧光染料的基因特异寡核苷酸探针来检测产物;而非特异性检测方法是在在PCR反应体系中,加入过量荧光染料,荧光染料特异性地掺入DNA双链后,发射出荧光信号。前者由于增加了探针的识别步骤,特异性更高,但后者则简便易行。本公司承接mRNA的相对定量和绝对定量,miRNA的相对定量。

欢乐时时彩 荧光定量PCR较常用的方法是DNA结合染料SYBR GreenⅠ的非特异性方法和Taqman水解探针的特异性方法

非特异性SYBR Green I染料法

欢乐时时彩 SYBR Green I是一种结合于所有dsDNA双螺旋小沟区域的具有绿色激发波长的染料(结合示意图),在游离状态下,SYBR Green I发出微弱的荧光,但一旦与双链DNA结合后,荧光大大增强(作用机理图)。因此,SYBR Green I的荧光信号强度与双链DNA的数量相关,可以根据荧光信号检测出PCR体系存在的双链DNA数量。

特异性Taqman水解探针法

Taqman荧光定量技术是以Taqman荧光探针为基础,Taqman荧光探针为一寡核苷酸,两端分别标记一个荧光发射基团和一个荧光淬灭基团。探针完整时,发射基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收;

PCR扩增时,Taq酶的5’-3’外切酶活性将探针酶切降解,使荧光发射基团和荧光淬灭基团分离,从而荧光监测系统可接收到荧光信号,即每扩增一条DNA链,就有一个荧光分子形成,实现了荧光信号的累积与PCR产物形成完全同步。从而实现定量(如下图)。常用的荧光基团是FAM, TET, VIC, HEX

扩增曲线

熔解曲线


客户需要提供

详细的实验要求,数据分析要求,基因名称(提供Genbank登录号),待测样本(清晰样品编号),保证样本质量。

送样要求

1、组织样本在取样后,迅速放入Trizol或RNA保存液中;

2、细胞请用培养基,Trizol或RNA保存液;

欢乐时时彩 3、RNA保存液保存的样本可冰袋运输;其它保存条件请干冰运输。

注:捷瑞生物可免费提供RNA保存液,如有需要请联系销售员

检测周期

常规检测任务2-3周内完成,具体时间根据要检测的基因和样本数而定

欢乐时时彩 客户将得到结果

提供电泳图片,引物调试与样本扩增相关图片(扩增曲线/溶解曲线/标准曲线),定量PCR导出的原始数据,结果的初步汇总分析以及实验报告;



合肥世诚生物技术有限公司

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公司技术平台特色:  

分子生物学技术服务项目包括:

TA克隆,亚克隆;质粒构建,荧光定量PCR检测;RNAi干扰;miRNA检测;SNP分型;STR检测等;

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